试剂产品

产品介绍

本产品是2×Mix预混合试剂，染料法进行 qPCR 的专用试剂，能够实现在单个反应孔中进行荧光定量PCR反应。本产品含有热启动Taq酶、SYBR Green I、dNTPs、Mg2+等，本产品对反应缓冲体系进行了深度优化，能够提高反应的扩增效率， 促进低浓度模板的有效扩增，可以进行高灵敏度的 PCR 反应。本产品针对不同品牌型号的荧光定量PCR 仪，分别提供不同浓度的Rox 参比液（High Rox/Low Rox），用于校正孔与孔之间的荧光信号误差。

反应体系

组分 体积（ul） 终浓度
GUeasy Taq SYBR Green qPCR Master Mix 10 1×
Forward Primer（10uM） N 0.1-0.5uM
Reverse Primer（10uM） N 0.1-0.5uM
50×High or Low Rox 0.4 1×
Template 1-5 -
ddH2O up to 20ul -

参考程序

循环步骤 温度 时间 循环数
预变性 95℃ 1-2min 1
变性 95℃ 5-15s 40
退火/延伸 60℃ 30s
溶解曲线阶段 根据仪器默认程序设置 1

适用机型

High Rox 适用机型： ABI 5700, 7000, 7300, 7700,7900HT ,7900HT Fast, StepOne, StepOne Plus.

Low Rox 适用机型：  ABI 7500, 7500 Fast, ViiA7, QuantStudio 1Plus/3/5/6 Flex/7 Flex/12k Flex;
Stratagene MX3000P, MX3005P, MX4000.

不需要Rox 校正的仪器型号：
Eppendorf Mastercycler ep realplex, realplex 2s;
Qiagen Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;
Roche Applied ScienceLightCycler 2.0; Lightcycler 96 ,LightCycler 480;
Thermo Scientific PikoReal Cycler;
Cepheid SmartCycler;
Illumina Eco QPC;
Bio-Rad CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4.

注意事项

  • 扩增曲线：标准的扩增曲线为S 型。

    • 1)   Ct 值在20-30 之间时，定量会分析比较准确，超出范围可对模板进行调整；

    2)   Ct 值在35以上 时，检测结果无法定量分析基因的表达量，但可用于定性分析。

  • 熔解曲线：

    • 熔解曲线为单峰，说明反应特异性好可以进行定量结果分析；如果熔解曲线出现双峰、多峰，则不能进行定量分析。熔解曲线为双峰，需要通过琼脂糖凝胶电泳判断非目标峰是引物二聚体还是非特异性扩增， 如果是引物二聚体，需要降低引物浓度，或者重新设计扩增效率较高的引物。如果是非特异性扩增，则需要提高退火温度，或者重新设计高特异性的引物。

产品信息

产品编号 产品名称 规格 单位 目录价格(RMB)
KQRM1-1 GUeasy Taq SYBR Green qPCR Master Mix 1ml 支 200
KQRM1-3 GUeasy Taq SYBR Green qPCR Master Mix 3ml 支 500
KQRM1-5 GUeasy Taq SYBR Green qPCR Master Mix 5ml 支 800

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